一种新的双环探针实时PCR方法与传统测序法检测

福建地区大肠癌、肺癌患者K-ras基因突变的研究

厦门市第一医院、福建省肿瘤医院、中国人民解放军174医院、厦门艾德生物医药科技有限公司

     厦门艾德生物医药科技有限公司收集临床肿瘤病理石蜡切片样品827例（厦门市第一医院、福建省肿瘤医院、中国人民解放军174医院），其中肠癌样品583例，肺癌样品244例，提取DNA后，对K-ras基因12和13密码子进行扩增并测序，同时使用艾德公司K-ras基因突变ADx-Kras荧光PCR试剂检测样品，统计两份方法检测K-ras基因12和13密码子的突变率和各个突变类型的数目。

  结果：ADx-Kras双环探针实时PCR对827例样品检测都得到了清晰明确的结果，检测成果率为100%，Sanger测序成功检测了677例，成功率为81.9%。583例肠癌样品中双环探针实时PCR检测出192例突变，突变率为32.2%，Sanger测序成功的样品533例，检出突变160例，突变率为30.0%。244例肺癌样品中双环探针实时PCR检出26例，突变率为9.0%，Sanger测序成功的样品144例，检出突变12例，突变率为8.3%。677例Sanger测序成功的样品中172例两种方法均检测为K-ras基因突变阳性，467例均检测为野生型，38例双环探针实时PCR检测为突变而Sanger测序为野生型。两种方法突变检测一致率为：100.0%，野生型检测一致率为：92.5%，总体检测一致率为：94.4%。配对χ²检验，χ²=36.03，P<0.005，按a=0.05水准，差异有统计学意义，可认为两种检测方法的突变检测结果有差异，双环探针实时PCR检测突变率较高。

结论：福建地区肠癌中携带有K-ras突变率与其他研究报道接近，肠癌中K-ras突变率（32.2%）明显高于肺癌（9.0%）。对于福尔马林固定石蜡包埋样品而言，双环探针实时PCR对样品的DNA质量的耐受性较好，检测成功率高于Sanger测序，而且ADx-Kras双环探针实时PCR仅一步操作，闭管检测，无污染，灵敏度高，检测时间短，而测序法步骤繁琐，易污染，耗时久。因此，ADx-Kras双环探针实时PCR具有很好的临床实用性。